HILIC技术是用来分离极性或者离子化合物的。与反相模式不用，HILIC模式是使用反相的流动相，但是样品按照正相的出峰顺序。极性分析物会被隔离在填料表面吸附的水层之外或者进入水层，并且与填料的硅烷基基团进行离子交换相互作用。总而言之，这会增强极性化合物的保留，并且增加上样量。在反相条件下，增加流动相中乙腈的含量，样品的保留会减弱；而在HILIC模式下，增加流动相中乙腈的含量，样品的保留会明显的增强。
    因此，对于极性化合物的洗脱，HILIC模式和反相模式是互补的。富士硅化学有限公司开发了两款HILIC模式的填料，命名为“HLC”硅胶。两种HLC硅胶都含有两性的官能团，共价键合在硅胶表面。“HLC-A”用于分离纯化有机酸、核酸和糖类；“HLC-P”用于分离氨基酸、多肽。

HLC硅胶

富士硅化学提供两款HLC硅胶：“HLC-A”和“HLC-P”。

HLC-P：羧基链连接烷基酰胺基（叔酰胺）

HLC-A：2个羧基链连接烷基酰胺基（叔酰胺和仲酰胺）

HILIC分离介质

在HILIC模式下，初始流动相条件用的是高比例有机溶剂和水。这种洗脱体系使得单一化合物得到分离，并且之后的处理步骤也相对简化（旋蒸或者冻干）。洗脱体系中水含量的增加，使得样品更容易被洗脱出来。因此，在HILIC模式中，与水易混合的有机相体系最为常用，比如乙腈-水体系。以下应用给出了使用HLC-A硅胶，在乙腈-水等度体系中，分析和制备的应用。

图1 HILIC模式下，核酸类物质的分离

乙腈、THF和二氧六环通常溶解在水中作为流动相使用，而不会产生氢键相互作用。在高水相的条件下，洗脱时间变快。虽然反相体系常用于水溶性化合物的分离，但是HLC硅胶更适合用于极性化合物的分离。

图2 不同流动相条件下样品的保留

HLC-P硅胶的应用

（1）氨基酸的HPLC和TLC分离

（2）多肽的HPLC和TLC分离

（3）制备分离案例

HLC-A硅胶的应用

（1）核酸的HPLC和TLC分离

（2）核酸、核苷酸和糖类的HPLC分离

（3）有机酸的HPLC分离

（4）制备分离案例

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