前言

采用高性能尺寸排阻色谱法（GFC或SEC）进行多肽分离，操作简便，不仅可用作检测分子量的手段，还可作为纯化多肽与蛋白质分解产物如多肽片断的方法之一。可与反相色谱法（RPC）及离子交换色谱法（IEC）联用。同时，在临床上还通过把GFC进行比较，来推测病程的进展。

表1所示为TSKgel色谱柱在采用GFC法进行多肽分离的相关文献及其概要。

一般情况下，采用GFC法分离多肽所使用的填充剂多为TSKgel的SW硅胶型填料而非TSKgel的PW树脂型填料。本文中将针对这些填充剂（TSKgel G2000SWXL以及TSKgel G2500PWXL）在多肽分离的应用上进行探讨。

实例应用

1）标准多肽的分离

表2所示为各多肽标准液的洗脱体积，图1所示为标准曲线。洗脱液采用含有45%乙腈的0.1%TFA溶液。所有TSKgel G2000SW_XL的样品洗脱速度均慢于TSKgel G2500PW_XL。同时，在TSKgel G2000SW_XL中，肌球蛋白（MW17800）进入填充剂的小孔内部，但在TSKgel G2500PW_XL中，肌球蛋白被小孔排阻，从外水体积中被洗脱。根据其结果，可认为TSKgel G2500PW_XL在上述洗脱液条件下的多肽分子量排阻界限推测为8000，相比之下，硅胶型填充剂TSKgel G2000SW_XL，可适用于从低分子量到高分子量区域更广的范围。

另一方面，如样品分子量低于3000，TSKgel G2500PW_XL显示的标准曲线与TSKgel G2000SW_XL几乎趋于相同，分离范围非常接近。但是，对比各多肽的洗脱体积，两者尚存有微妙的区别（尤其是亮氨酸脑啡肽），这是由于在分离过程中样品与填充剂之间的相互作用（离子性、疏水性的相互作用等）而造成的影响。

图2、3所示为TSKgel G2500PW_XL与TSKgel G2000SW_XL在分离多肽标准品时的对比图。通过色谱图可以明确的看出，TSKgel G2000SW_XL吸收峰形与分离带的宽度均更佳，因此其分离性能更为优异。另一方面，如果多肽的分子量小于1000，由于样品与填充剂之间的某些相互作用，使用TSKgel G2500PW_XL时的分离效果要高于TSKgel G2000SW_XL。例如图2中所示的后叶催产素（MW1007）与亮氨酸-脑啡肽（MW555）、以及图3所示的TRH（MW362）与甘氨酸（MW75）均显示了其分离效果高于TSKgel G2000SW_XL。

如上所述，在整体上，TSKgel G2000SW_XL具有更高的分离效果，但对于分子量低于1000的多肽样品，TSKgel G2500PW_XL的分离效果会更佳。另外，由于TSKgel SW型硅胶填充剂不具有耐碱性，如样品需要在碱性条件下进行分离，或使用NaOH溶液进行色谱柱清洗时，请考虑使用TSKgel PW型色谱柱。

 

 

2）蛋白消化物的分离

图4所示为分离基因重组ProteinA的TRCK-胰蛋白酶消化物的实例。样品中含有与蛋白质消化物分子量不同的各类多肽。如上所示，由于TSKgel G2000SW_XL色谱柱的分离范围较宽，其分离效果也更好。（该样品通过RPC分析的结果，可观察到约有60种多肽峰在RPC下被检测到）。

总结

表3所示为采用尺寸排阻色谱法进行多肽分离时，TSKgel色谱柱产品的不同性能。一般考虑采用TSKgel G2000SW_XL较为适合，但考虑到填充剂的耐碱性与多肽的分子量大小等因素，也可根据情况而选择使用TSKgel G2500PW_XL或TSKgel G3000PW_XL。

 

TSKgel	多肽、蛋白质的分子量区间范围	特征
TSKgel G2000SWXL	100-100000*	首选色谱柱 分离范围大 分离效果好
TSKgel G2500PWXL	100-5000	用于低分子量的多肽样品 具有耐碱性
TSKgel G3000PWXL	1000-50000	用于高分子量的多肽样品 具有耐碱性

*预估值

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