薄层层析（TLC）是常用的一种分离和分析方法。
原理：利用吸附剂对样品中各组分吸附能力不同，及展开剂对它们的解吸附能力的不同，使各组分达到分离的目的。
特点：微量、快速、简单、节省。
分类：
吸附薄层层析（硅胶）
分配薄层层析（纤维素）
薄层离子交换层析（离子交换剂）
薄层凝胶层析（分子筛凝胶）
硅胶：表面带有硅醇基（-Si-OH），呈弱酸性（pH=4.5），活性硅胶适合分离酸性或者中性化合物，如酚类、有机酸、甾体化合物以及氨基酸类，是基于吸附作用。非活性硅胶含有一定的水，在分离色素时是基于分配作用。
氧化铝：弱碱性（pH=9）、酸性（pH=4）及中性（pH=7.5）三种氧化铝。弱碱性氧化铝用来分离中性或碱性化合物；中性氧化铝适用于酸性及对碱不稳定的化合物的分离；酸性化合物可用酸性氧化铝分离。
化学键合相（C18、C8等）
各种硅胶板的区别：
硅胶G：含有13%煅石膏（GYPSUM）粘合剂的硅胶。
硅胶H：不含粘合剂的硅胶。
硅胶HF254：不含粘合剂，含有一种无机荧光剂（如锰激活的硅酸锌），在254nm波长紫外光下，呈强烈黄绿色荧光。
硅胶GF254：含有煅石膏粘合剂，含荧光剂，在254nm波长紫外光下，呈强烈黄绿色荧光。
硅胶HF254+366：不含粘合剂，在254nm与366nm波长有荧光。
硅胶PF254：制备型，在254nm有荧光（有荧光剂，适用于不发光不易显色物质的制备与分离）。
几种硅胶板标注方法：
原点间距0.8~1mm，底边距离0.5~0.8cm即可。
反应液的取样：
一般极性溶剂体系 | 强极性溶剂体系 | 需要淬灭的体系 | 强碱、酸性物质 |
可以直接取样，也可以稀释后取样。 | 最好简单后处理（加水和有机溶剂萃取）以后取样。 | 处理（如加水或酸和有机溶剂）后取样 | 最好中和后取样 |
Note：1. 产品在水相或有机相
2. 有无没有溶解的固体
点样：
手动点样：灵活方便，常用于各种TLC鉴别中。
自动点样：重现性和准确性好，常用于薄层扫描法的含量测定。
点样量：原点位置的负荷有限，体积0.5~10ul，浓度通常为0.5~2mg。直径3mm以内。
样品溶剂：原则上应选择对样品可以溶解，但溶解度不是很大的溶剂。
Note：1. 点样的浓度要控制适当。
2. 点的斑点较小，展开的TLC分离度好。
3. 0.3mm毛细点有机相，0.5mm点水较方便。
点样常见问题：
1. 点样量太大。展开剂不能全部负载。
2. 太浓了。展开剂从原点外围绕行。
3. 浓。未分开。
4. 样品溶剂残留。吹干时应注意高温破坏样品。
5. 点样量太少。看不清楚。
6. 样品溶剂中溶解度很大。原点将变成空心圆。
展开剂的选择原则：
1. 对所需成分有良好的溶解性。
2. 可使各成分间有较好的分离。
3. 待测组分的Rf在0.2~0.8之间。
4. 不与待测组分发生化学反应。
5. 沸点适中，粘度较小。
6. 展开后组分斑点圆且集中。
7. 混合溶剂最好新鲜配置。
常用展开剂极性大小顺序：
石油醚＜二氯甲烷＜乙醚＜四氢呋喃＜乙酸乙酯＜丙酮＜正丙醇＜甲醇＜水
展开剂体系的选择原则：
※ 一般极性的化合物：PE/EA体系
※ 极性较大的化合物：DCM/CH3OH体系
※ 脂肪类胺化合物：在展开剂中加入0.1%（约为1滴）的氨水或三乙胺
※ 有羧基官能团存在的化合物：在展开剂中加入微量的醋酸（乙酸或甲酸的使用，一方面增大展开剂极性，另外也可以抑制硅胶上羟基的作用，减少拖尾）
另外常用的混合体系：
PE/DCM，PE/Acetone，Ether/DCM，EA/DCM，EA/CH3OH
展开方法：
展开方法有单向、单向长板、多次多种极性展开、双向展开等。
显色：
一看：首先在日光下观察，划出有色物质的斑点位置
二照：在紫外灯下观察有无暗斑或荧光斑点
三碘：大部分有机物会吸附碘可逆的产生棕色或黄色斑点
四显：既无色又无紫外吸收得物质，可以用显色剂显色
各种显色剂及其配置方法：
硫酸溶液 | 硫酸-水（1:1）溶液；硫酸-甲醇或乙醇（1:1）溶液；1.5mol/L硫酸溶液与0.5-1.5mol/L硫酸铵溶液 | 大部分化合物 |
高锰酸钾 | 1.5g KMnO4+10g K2CO3+1.25ml 10%NaOH | 含还原性基团化合物，比如羟基，氨基，醛 |
磷钼酸（PMA） | 乙醇5%磷钼酸乙醇溶液，喷后120℃ （可用加热枪）缓慢烘烤 | 还原性化合物显蓝色，再用氨气熏，则背景变为无色 |
茚三酮 | 0.2g溶于乙醇100ml中。方法：喷后于110℃加热。醋酸呈红紫色斑点 | 氨基酸 |
氯化铁 | 1% FeCl3+50%乙醇水溶液 | 氯化铁 |
硫酸铈 | 10%硫酸铈（IV）+15%硫酸的水溶液 | 生物碱 |
展开判断：
※ 一般以目标产物的Rf值在0.4~0.6左右为佳。
※ 一般选用展开剂极性应从低到高原则
异常情况：
TLC用途：
1. 监测反应进程
2. 官能团转化与TLC极性大致表现的讨论
3. TLC和其他分析方法组合判断
4. 跟踪萃取、重结晶等后处理的情况
5. 摸索和确定柱层析时的洗脱条件的情况：
Note：1. Rf值在0.2左右的展开剂比例为冲洗剂的合适值。
2. 过柱时组分流出顺序未必和TLC上点极性顺序一致。
6. 制备TLC
1） 点板
Note：a. 溶剂：极性小，溶解性好
b. 上样量：40-60mg
c. 上样的位置：距离两端大约1cm，距离底边大约2cm。
2） 展开 
Note：a. 展开之前要将溶剂吹干
b. 所用展开剂的极性较展小板的时候大
3） 显色
4） 疑似色带的确定
5） 刮板
Note：刮板后，在没有得到结论前，不能轻易丢掉薄板。
6） 洗脱
Note：洗脱剂应避免加入过多的甲醇，以免产物中混有大量的硅胶。
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