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His标签蛋白纯化亲和介质选择指南

过渡态金属离子（Cu²⁺>Ni^2+>Zn²⁺>Co²⁺）能够与电子供体，如N、S、O等原子以配位键结合，金属离子上剩余的空轨道是电子供体的配位点，在溶液中会被水分子或阴离子占据，当蛋白质表面氨基酸残基（His）与金属离子的结合力较强时，氨基酸残基的供电原子就会与金属离子结合形成复合物，取代原先结合的水分子或阴离子，这样就能使蛋白质分子结合在固体表面。His标签蛋白的His和介质结合，由于蛋白质表面的氨基酸的种类、数量、位置和空间构象不同，因而具体使用时根据金属配基的亲和力大小不同，选择不同的金属配基进行分离纯化。

His标签蛋白纯化亲和介质对比

名称	Ni-IDA	Ni-IMAC	Ni-TED
螯合比例	3:3	4:2	5:1
还原剂（mM）	避免使用	5	20
螯合剂（mM）	避免使用	1	100
pH范围	3-12（工作） 2-14（清洗）	3-12（工作） 2-14（清洗）	3-12（工作） 2-14（清洗）
清洗再生	9步（脱镍-清洗-再生）	9步（脱镍-清洗-再生）	5步（清洗）
适用范围	常规His标签蛋白纯化（活性条件）	常规His标签蛋白纯化（活性条件和变性条件）	可用于含有高还原剂、螯合剂His标签蛋白样品和真核分泌His标签蛋白纯化（低丰度样品及含有变性剂样品使用效果降低）

His标签蛋白纯化亲和介质的清洗