一、测试柱效
当您收到一支新的色谱柱的时候,一定按照包装盒内的出厂检测报告的操作条件,进行柱效测试!!!TSKgel色谱柱的柱盒内附有出厂检测报告 (Inspection Data ) 以及使用条件和质量标准 (OCS) 。
▼ 出厂检测报告(有RI检测器)
▼ 出厂检测报告(无RI检测器)
二、PWXL 系列色谱柱初次使用注意事项
1. 流动相现配现用,配好后使用0.45μm的水相滤膜过了后再超声脱气。
2. 样品一定要完全溶解后,再使用0.45μm的针式滤头过滤后再进样。
3. G2500PWXL/G3000PWXL的耐受压力是4.0MPa,G4000PWXL /G5000PWXL/G6000PWXL的耐受压力是2.0MPa,所以要在仪器上设定限压保护。
4. 初次拿到柱子后,参照柱盒中的Inspection data的方法评估柱效后再使用。
5. 柱子一定要常温保存。不能放在冰箱冷藏。
6. 当柱子峰形变宽了或者是压力升高了,就需要清洗柱子了。
7. 对于使用尿素或者含SDS的流动相的柱子,最好专柱专用,表面活性剂对柱床有不可逆的改性作用。
8. 最好使用保护柱,这样可以有效延长分析柱的使用寿命。
三、色谱柱的清洗步骤
随着使用时间或进样次数的增加,出现柱效下降无法达到分离要求,或伴有峰型拖尾、分叉等情况时,就需要清洗色谱柱。建议清洗过程中将色谱柱与检测器断开连接,防止流通池污染。此类型色谱柱中的充填介质与样品间常会发生:(1) 离子相互作用;(2) 疏水相互作用等现象。
吸附的主要原因:
(1) 离子性吸附:分子尺寸排阻色谱柱中的树脂充填介质,由于羧基带有负电荷(尽管非常少),会与样品中带有正电荷的组分发生离子吸附作用。
(2) 疏水性吸附:聚合物基质的SEC色谱柱的充填介质,会与一些疏水性较高的样品(如:具有苯环的化合物)发生疏水吸附作用。
清洗方法:
1、去除离子性杂质:
对于阳离子性吸附物质,可以通过提高盐浓度进行过柱清洗。
2、去除疏水性杂质:
对于疏水性吸附物质,可以通过提高有机溶剂的浓度进行过柱清洗。
3、去除难溶性蛋白质:
使用含尿素的溶液清洗。
请根据样品性质,从方法1和2中选择适当的清洗方法。如果色谱柱性能仍不能恢复,可考虑采用方法3。但需注意尿素可能会残留在色谱柱上。
★请注意:应逐渐提高流速,以免损坏色谱柱。
四、色谱柱的保存
• 短期保存(2-3天后还要使用)
如果数天内不会使用色谱柱,请从设备上取下色谱柱。如果溶剂中不含任何腐蚀性的离子,请使用保护塞封住色谱柱的末端。如果溶剂中含有腐蚀性离子,如卤素,请在保存之前,使用纯水清洗色谱柱。
• 长期保存(超过3天以上不用)
如果长时间不使用色谱柱,请使用纯水替换溶剂。然后请从设备上取下色谱柱,并使用保护塞封住色谱柱的末端。长期保存(例如,超过 3 个月)时,请使用含有0.05 %叠氮化钠的水溶液保存。