Sephadex G-type 凝胶过滤填料

GE 的 Sephadex 系列的凝胶过滤填料是珠状凝胶，它是葡聚糖和环氧丙烷偶联介质，拥有极高的选择性。 不同型号具有不同分离范围，颗粒大小不同。粗颗粒流速较快，细颗粒流速较慢，分辨率较高。

其主要应用在低和高分子量分子间的分离。常常应用于脱盐、缓冲溶液的置换、去除一些生物大分子中的小分子，例如两性电解物、去垢剂、放射性荧光标记物、苯酚等等。

操作技术信息

1、洗脱液的选择：

•洗脱液不会直接影响分辨率。

•为了避免离子的影响，洗脱液的离子强度应该至少是 0.15M

•选择的洗脱液要为样品蛋白提供很好的溶解性和稳定性。

•选择合适的洗脱液常常能够简化后续的分离步骤。例如，为了后续的离子交换层析，可用开始的缓冲溶液平衡柱子。

2、洗脱液的准备

•使用色谱级或分析级溶剂，盐，和缓冲液

•用清洁玻璃器皿配制并存储洗脱液

•洗脱液可用 0.22 μ m 的无菌过滤器过滤而且在使用前最好脱气。

•不使用时在 4 ℃条件下存储洗脱液，为了防止细菌生长，可以添加抗菌剂。

•低温存储的洗脱液应放至室温后再使用，以防止产生气泡（如果在使用前洗脱液已储存，建议可先除去气体）

3、样品制备

•当使用的填料粒径范围为10-15 μ m时，样品量≤0.5%柱体积；当填料粒径范围为30-100μ m时，上样量≤5%柱体积。

•在组分分离时，比如脱盐，上样量可达到 30 ％柱体积。

•当重复实验时，采用相同的方法制备样品，保持样品的浓度和体积不变。

•选择的层析条件要保证样品是稳定的和可溶的。

•通过离心（例如，10 000g 离心 10min）或过滤去除样品中的微粒（如果样本是溶解在有机溶剂，一定要选择耐有机溶剂的过滤器）

•如果样品有较高的粘度，用洗脱液进行稀释。（避免大于 30mg 蛋白/ml 样品）

•在低温下存储样品，除非这导致样品析出或沉淀;避免长期存储，除非可以存储在-70℃

•使用蒸馏水

•使用色谱级或分析级溶剂，盐，和缓冲液。

4、实现分离最优化 

•样品量—上样量越少，分辨率越高。

•流速—高分子量物质（蛋白质），较低的流速有更好的分辨率。但对于低分子量物质（小肽）与其相反。因为他们扩散速度较快，所以分离时间越长，样品扩散区域越广。

•柱长度—将两个柱子串联，可提高有效柱床高度。

•缓冲液的选择和 pH 值通常影响较弱。然而，低 pH 值可提高疏水相互作用，在某些情况下常常能改善物质分离（如肽类混合物的分离）