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第十五期 TOSOH TSK-GEL 凝胶色谱柱

2015年02月11日source:管理员
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凝胶过滤色谱,又称凝胶渗透色谱。 一般来说,在生物化学界中常用的名称是凝胶过滤色谱(GFC),在高分子化学界中常用的名称是凝胶渗透色谱(简称 GPC)。


TOSOH 公司始建于 1935 年,原名东洋曹达工业株式会社(TOYO SODA),其产品优异的产品性能,在生物制药,生物技术等领域享有盛誉。


TSK 凝胶柱广泛应用于制药和生物工程中蛋白质,多肽,多糖,寡糖,DNA,RNA 等生物高聚物的分离,纯化或分子量的测定。



TSK-GEL SW 系列色谱柱的填料以刚性的球型硅胶为基质,在其表面通过共价键化学键合亲水基团而成。其 pH 适用范围为 2.5-7.5,可以使用与水完全互溶的有机溶剂,如乙腈、丙酮、甲醇或乙醇等。适合分析分离蛋白质和多肽类样品。


TSK-GEL SW 系列色谱柱的选择指南



未知分子量的样品


TSKgel G3000SWXL是理想的摸索条件的色谱柱。

如果感兴趣的蛋白质的洗脱接近排除体积,下一步应该尝试使用G4000SWXL。相反,如果感兴趣的

蛋白质洗脱接近色谱末端,尝试使用G2000SWXL。

蛋白质(一般情况)

通过校正曲线或者评估蛋白质的分子量选择恰当的孔尺寸,继而可以选择出 TSK-GEL SWxl 系列色谱

柱中的一款使用。

单克隆抗体

TSKgel G3000SWXL通常用于质量控制。

样品量有限或者低浓度时,可以使用 TSK gel SuperSW 3000。

多肽

TSKgel G2000SWXL是多肽分析的首选。

样品量有限或者低浓度时,可以使用 TSK gel SuperSW 2000。


注意事项

 

安装说明

*流向*

安装使用时注意色谱柱上标明的流向箭头,安装反了会降低色谱柱柱效。

*去处气泡*

从仪器上安装和拆卸色谱柱时一定要注意不要让气泡进入,安装时要去除管路中的气泡。

*安装*

当进样端螺母拧下,有溶剂从接口溢出,可将色谱柱小心的与仪器连接,这样做可以保证没有气泡进入柱

子.如果没有党课从接处流出,将柱子反接,用低于 0.5ml/min 的低流速走柱,赶走气体。确定当脱气的

溶剂从色谱柱进样口流出后,按流向箭头所示接柱。

*正确使用*

柱子安装完成后,进行工作时要注意避免高压力和大流速,同时压力的快速变化也要避免。

保存说明

*日常使用*

如果柱子每天都使用,不需要将它从仪器上取下,流动相可在柱子中保留过夜。

*短期保存*

将色谱柱从仪器上取下,封紧保护螺帽。保存 4-30 温度度,不得低于 4 度。

*长期保存*

用水溶液或含 0.05%的叠氮化钠缓冲液保存。保存温度 4-30 度,不得低于 4 度。不能受阳光直射。

溶剂

*替换溶剂*

色谱柱中原厂保存的溶剂是 0.1M 的磷酸缓冲液含 0.05%的叠氮化钠和 0.1M 的硫酸钠。若流动相要改变,

可用低于 0.5ml/min 的流速走柱。若要用有机溶剂替换,先用蒸馏水过渡,再用有机溶剂走柱,注意浓度

梯度,有机溶剂浓度的快速变化会使柱效降低。

*PH 范围*

SW 系列色谱柱的溶剂 PH 范围在 2.5-7.5。

*溶剂范围*

SW 系列所用的溶剂除了水溶液和缓冲液,还可以使用亲水性的有机溶剂,包括甲醇,乙腈以及它们的水

溶液。

*清洗溶液*

PH 较低(如: PH 3.0),浓度较高的盐溶液(如:0.5M Na2SO4);

添加水溶性有机物(MeOH,ACN,EtOH,10%-20%)的极性缓冲液;

SDS(0.1%),尿素(8M)或胍(6M)的缓冲溶液。注意:这些试剂很难被去除。它们需要使用 20-40 个柱体积

的 20%ACN 进行冲洗。因此,只有当先前的清洗方法无效时才选择使用本方法。

流速

*推荐流速*

SW 色谱柱的推荐流速在 0.5-1.0ml/min,最大流速是 1.2 ml/min,柱子流速不能超过最大流速。 

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