产品介绍
AMBERCHROMTM XT系列树脂是聚合物反相填料,其基质是聚苯乙烯-二乙烯基苯。它是现有的AMBERCHROMTM CG系列的改良产品,提供了更好的耐压性,改善了分离效果,对于苛刻的在位清洗(CIP)程序也依然很稳定。
AMBERCHROM™ XT系列树脂可用于生物分子的纯化,对于使用者来说,在反相色谱实验中,相对于硅胶,它提供了一个更为经济的选择。AMBERCHROM™ XT系列树脂在分离纯化疏水和极性的多肽、小分子蛋白和寡核苷酸上性能优越。它很适合分离治疗性的蛋白质,如胰岛素。
由于填料优异的pH稳定性,它可以分离纯化大多数的多肽和寡核苷酸,这就意味着可以用较少的投入获得较大的收益。在分离的时候,AMBERCHROM™ XT系列树脂可以提供高产率,由于它优越的刚性,可以使用在中压系统上,耐压60bar。
优秀的pH稳定性
和反相硅胶填料不同,由于AMBERCHROM™ XT树脂是聚合物基材,没有氢键作用,它可以在pH 1~14的范围内使用和清洗。图1说明,使用1.0M NaOH作为在位清洗试剂,在经过70次循环清洗后,AMBERCHROM™ XT树脂的保留性没有发生改变。
较高的处理能力
从图2中可以看出,AMBERCHROM™ XT树脂和硅胶产品的性能相近。聚合物基材的AMBERCHROM™ XT树脂可以对目标分离提供更高的效率。
AMBERCHROM™ XT树脂对于寡核苷酸的分离,性能良好。以下表1列出了AMBERCHROM™ XT系列树脂的物理特性。使用一支1cm×25cm装有AMBERCHROM™ XT树脂填料的色谱柱,只需要一步就可以分离纯化20-聚体的寡核苷酸。具体步骤是:未完全去保护的天然胸苷,处理后上柱子洗脱。使用阴离子交换色谱进行纯度测定。
良好的机械稳定性
一般情况下,聚合物基质的树脂其刚性都不足以承受高压,进而不适合用于高效液
相色谱仪。
独特的选择性
AMBERCHROM™ XT树脂的另一个优点,就是它的独特的选择性。下图说明,4种血管紧张素在装有AMBERCHROM™ XT树脂填料的柱子上可以完全分离开,而其他的硅胶基质的树脂很难做到完全分离。
对疏水和极性的多肽显现出良好的分离性能
万古霉素,一种疏水的环形多肽,作为一个典型的例子,证明AMBERCHROM™ XT树脂的分离性能在碱性pH条件下有着明显的改善。当纯化过程在pH 2.0的条件下进行时,AMBERCHROM™ XT树脂表现出典型的反相洗脱模式。
但是,当AMBERCHROM™ XT树脂在pH 8.0碱性缓冲溶液的条件下使用时,其分离性能提高一倍,洗脱和纯化的能力较传统工艺有了明显的改善。
对万古霉素(Sigma,USP 级,MW 1485)的精提步骤进行了改良。上样时的纯度约为89%。进行提纯制备时,在两个不同的pH条件下,使用一支装有AMBERCHROM™ XT系列树脂填料的1cm×25cm的色谱柱。色谱条件是:3%~25%的乙腈进行线性的梯度洗脱。随着pH值的增大,纯化效果越来越好。这说明,对于改善纯化效果来说,填料有较宽泛的pH稳定性是有必要的。
在碱性条件下,万古霉素表现出疏水分子的特性,AMBERCHROM™ XT系列树脂填料的动态载量翻倍。这说明了具有宽泛pH范围的聚合物基质树脂的另一个优点。
优越的动态载量
同竞争产品相比,AMBERCHROM™ XT树脂对宽泛的分子量范围的分子有着优越的动态载量。表2给出了万古霉素(MW 1485)、牛胰岛素(MW 5600)和溶解酵素(MW 14000)的动态载量值。测试使用的条件是0.1% TFA缓冲溶液,线性流速153cm/h。
结 论
AMBERCHROM™ XT反相树脂填料特点如下:
Ø 对生物大分子的载量高;
Ø 机械性能稳定;
Ø 比硅胶基质的树脂pH 应用范围广;
Ø 效率高,选择性独特;
Ø 对于多肽和寡核苷酸的分离载量大;
Ø 是分离疏水和极性的多肽的理想介质;