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第一百零九期 采用TSKgel色谱柱分析保健食品中免疫球蛋白IgG

2018年07月31日source:管理员
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IgG是免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,IgG)的缩写,是血清主要的抗体成分,约占血清Ig的75%。其中40~50%分布于血清中,其余分布在组织中。IgG是唯一可以通过胎盘的免疫球蛋白。IgG的功能作用主要在机体免疫中起保护作用,大多数抗菌、抗病毒;应对麻疹、甲型肝炎等,能有效地预防相应的感染性疾病。免疫球蛋白分为五类,即免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白D(IgD)和免疫球蛋白E(IgE)。


      免疫球蛋白IgG,目前已作为功效成分添加于保健食品中,该成分对于增强免疫力、调节动物体的生理功能和某些特定物质的代谢等均有一定效果。

      食品安全国家标准GB/T 5009.194-2003中的IgG检测法,是根据高效液相亲和色谱的原理,在磷酸盐缓冲液条件下免疫球蛋白IgG与配基连接,在pH 2.5的盐酸甘氨酸条件下洗脱免疫球蛋白IgG。 

     下文中采用了日本东曹公司的亲和色谱柱 TSKgel Protein A-5PW,参照GB/T 5009.194-2003,对初乳素样品中的IgG含量进行了分析。

      TSKgel Protein A-5PW 是一款亲和色谱分析柱,在多孔亲水性的聚合物基质填料表面键合了重组Protein A官能团。

表一  TSKgel Protein A-5PW色谱柱参数表

孔径

100  nm

粒径

20  µm

官能团

重组Protein  A








        色谱柱:TSKgel ProteinA-5PW (4.6 mmI.D.×3.5 cm)
        流动相A:pH 6.5, 0.05 mol/L磷酸盐缓冲液
            流动相B:pH 2.5, 0.05 mol/L甘氨酸盐酸盐缓冲液
            流速:0.4 mL/min
            柱温:35 ℃
            进样体积:20 μL
            检测器:UV 280 nm

表二 梯度洗脱表

时间(min

流速(ml/min

A%

B%

梯度

0

0.4

100

0

-

4.5

0.4

100

0

6

5.5

0.4

0

100

6

15.0

0.4

0

100

6

15.5

0.4

100

0

6

22.0

0.4

100

0

6




表三 采用TSKgel ProteinA-5PW 色谱柱分析初乳素中IgG样品峰参数结果

编号

名称

保留时间(min

理论塔板数

分离度

2

IgG

9.08

35565

18.99

 

分析结果表明,IgG与前面杂质峰的分离度Rs为18.99,两次进样测定结果的算数平均差值与算术平值比值为0.26%,完全满足国标中规定的检测要求。

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